08年的中国,没有医院拥有如此完善的高质量血清生物样本库。
协和也没有。
「所以,如果找不到验证数据,验证数据就没意义————」
「喝什麽?」顾亦舟打断了他。
「啊?哦,呃,可乐吧,可乐就好。」
易向晚接过冰可乐,在自己的脖子上滚了一圈,好凉。
而後他说道:「师兄,我说这个不是打击老大的意思,我的意思是————」
「行了,别解释了,想那麽多干嘛?这些问题是老大需要考虑的,我们现在的任务是把提取这关过了,别到了最後,老大从欧洲、从挪威、从美国把样本找来了,结果咱们连RNA都提不出来,那才叫丢人。
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「靠,也是啊!确实有点想太多了————」
两个人带着水回到实验室。
发现江河已经回来了,正站在NanoDrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地汇报情况:「纯度提不上去,TrizoI的局限性,血清里的蛋白含量远超组织,吸取上清液的时候,不可避免地会带入杂质,如果要避免带入杂质,就只能吸取最表层的少量液体,但那样RNA的浓度又达不到下游PCR的要求,咋办?」
江河淡然道:「不早跟你们说过了?加糖原。」
实验室里的人都愣了一下。
老组员虽然听过江河讲这个事情,但是大家都不知道具体该怎麽执行啊————
「噢,怪我,讲的不够细。」
江河随後解释道:「在加入异丙醇沉淀之前,往水相里加入5微升浓度为5mg/ml的糖原作为共沉淀剂,不仅能作为载体帮助极微量的RNA聚集沉淀,还能让最後形成的沉淀团块变得肉眼可见,方便後续洗涤,减少丢失。」
陆晓林思考了一下,提出了疑问:「可是这解决不了杂质的问题啊,只要我们用移液枪吸水相,还是会吸到蛋白。」
江河回答:「所以,洗两遍,双重氯仿抽提,第一次加氯仿离心後,吸取上清液,移入新的离心管,然後,往吸出的这部分上清液里,再加一次等体积的氯仿,剧烈震荡,进行第二次离心,简单来说,牺牲第一次的取液量来换取纯度,然後再通过加入糖原共沉淀,把浓度拉回来。」
这下大家听懂了。
王晓晴在心里给自己点了个赞。
放弃思考,果然是正确的。
一听江河的就完
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