学校的实验室条件没那麽好。
空调老化,地方不大,房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧,大家却一点不觉得累,一个个热血沸腾的,就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这麽有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的CS1.6网吧赛0
时过境迁。
曾经的M4网瘾少年,现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出,打入离心管底部,反覆吹打。
王晓晴观察片刻後说:「测一下吧。」
蔡卓群点点头,拔下枪头,拿着样本走到NanoDrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本,滴在检测基座上,放下检测臂,在连接的旧桌上型电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活,转头问道:「多少?」
蔡卓群:「浓度12ng/ul,A260/280比值是1.32,A260/230比值是0.7。
C
王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有点无奈:「这已经是第四批废样了————」
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入DMSO的方法,解决了PCR扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题——
现在的瓶颈,卡在了提取上。
miRNA在血液中的含量极低,且非常容易被血液中的RNA酶降解。
纯度不够。
A260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间,低於1.8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而A260/230比值只有0.7,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,後面的PCR扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因:「王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。」
王晓晴摇摇头:「上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。」
陆晓林在一旁分析:「血清里全是蛋白,游离的核酸少,Tri
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